13. Трансплантация
НСК/прогениторных клеток в развивающийся мозг эмбрионов
Лабораторно полученные высокоочишенные прогениторные
клетки использовали для пересадки в развивающийся мозг мышей и других
лабораторных млекопитающих. Сперва клетки линии ЭСК наращивали до больших
плотностей над фидером в среде ДМЕМ-20% FCS + 1000 U LIF/мл. Для получения
эмбриоидных агрегатов клетки переносили на чашки, покрытиые желатиной, а
также убирали LIF из среды. Через 4 дня меняли на селективную среду
пролиферации (ДМЕМ/F12 + 5мкг/мл инсулина, 30 нм селениум хлорида, 5 мкг/мл
фибронектина. За 72 в селективной среде пролиферации 80% клеток погибало.
Среди оставшихся выживших клеток более 80% были нестин+ веретеновидные
прикрепившиеся клетки. Эти клетки прокрашивались антителами к кератину 8 и
поверхностному антигену SSEA-1 (Brustle O., Spiro C., Karram K. et al.,1997).
После инъекции очищенных прогениторных клеток человека в телэнцефалические
пузырьки мозга зародыша крысы 15-20 дня гестации наблюдали массированную
миграцию пересаженных клеток по всем растащим областям мозга. Наибольшая доля
клеток мигрировала из желудочков в серое вещество коры ,corpus collosum,
cтриатум, гипоталамус, гиппокамп, обонятельную луковицу, где
дифференцировались в нейроны и астроглию. Позднее всех появлялись
олигодендроциты ( если вводить трансплантат на поздних сроках развития
плодов). Часть пересаженных клеток оставалась в эпендиме желудочков, где
формировались кластеры донорских клеток в монослое эпендимы. Хотя пересаженные
прогениторные клетки содержали примесь типичных ЭСК, ни в одном случае не
наблюдали образования тератокарцином. Результаты показали, что с помощью
повторных пересадок можно достичь высокой доли химеризации мозга крыс.
|